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[分子生物]

如何设计引物

光辉岁月实名认证 发表于 2016-7-15 11:00 |查看: 94519|回复: 14|显示全部楼层 |阅读模式
各位大神,你们好,小弟我刚刚接触分子生物学实验,有很多不懂的地方,还得请教各位大神,能不能帮我设计一下引物。
cDNA模板是通过RNA反转录合成的。之前师兄设计的引物没扩出来,引物为:FP-CTCCCGTCCAACGGAACTAACC  Tm=63.8;RP-CGACCACGATCTCAACAACAAACA   Tm=60.3
cDNA序列:CTCCGCATTCGTGGCCATCCATCCTCCCGTCCAACGGAACTAACCCCCTTCTCCTTCCCC
CGGCGGCCAGCTTCCCCTACCAACCCTTCCCGCCTACATATACCGTCCCCCACATCCATA
CCACCACACCACACGACACCACCATCTGTACTCATTCAGCTGCCTCCGGCAAACTTAGAC
GTCACACGGATCCCCCATCTCGCAGCCAACCTAGTCGGCCGCTGGTACGTACTGAGAGTT
CAATGGCGGCGACGATGACGGTGGAGGAGGTGAGGAAGGCGCAGCGGGCGGAGGGGCCGG
CCACGGTGCTGGCGATCGGCACGGCGACCCCGGCGAACTGCGTGTATCAGGCCGACTACC
CGGACTACTACTTCAAGGTCACCAAGAGCGACCACATGGCCGACCTCAAGGAGAAGTTCA
AGAGGATGTGTGACAAATCGCAGATCAGGAAGAGGTACATGCACCTAACGGAGGAGATCC
TACAGGAAAACCCCAACATGTGCGCCTACATGGCGCCGTCTCTGGACGCGCGCCAGGATA
TTGTGGTTGTCGAGGTCCCGAAGCTCGGGAAGGCGGCGGCGCAAAAGGCGATCAAGGAGT
GGGGACAGCCACGGTCTAAGATCACCCACCTCGTCTTCTGCACCACCTCCGGTGTGGATA
TGCCGGGGGCCGACTACCAGCTGACCAAGATGCTCGGTCTTCGCCCGTCCGTGAAGCGCC
TCATGATGTATCAACAGGGATGCTTCGCCGGCGGGACGGTGCTTCGCCTAGCCAAAGACC
TTGCTGAGAACAACCGAGGCGCGCGCGTGCTCGTGGTCTGCTCGGAGATCACCGCGGTGA
CCTTCCGTGGCCCGCACGAGTCCCACCTCGACTCACTCGTGGGTCAGGCGCTCTTTGGTG
ATGGTGCAGCCGCGGTGATCATCGGTGCAGACCCCGACGTGTCCGTCGAGCGCCCCCTAT
TCCAGCTGGTATCTGCGAGCCAGACGATTCTGCCAGACTCAGAGGGTGCCATCGACGGCC
ACCTCCGGGAGGTCGGCCTCACCTTCCACCTCCTCAAGGATGTGCCTGGGCTCATCTCCA
AGAACATCGAGCGCGCCCTAGAGGACGCCTTCAAGCCATTGGGTATCGATGATTGGAACT
CCGTCTTCTGGATAGCGCACCCCGGCGGGCCAGCAATCCTTGACATGGTTGAGGCCAAGG
TAAACCTCAACAAGGAACGGATGCGCGCCACCAGGCATGTCCTCTCCGAATATGGCAACA
TGTCAAGCGCATGCGTTCTCTTCATCATGGACGAAATGCGCAAACGGTCCGCTGAGGATG
GGCACACCACAACCGGAGAGGGAATGGACTGGGGAGTTCTATTCGGCTTTGGTCCCGGCC
TCACCGTCGAGACGGTCGTCCTCCATAGCGTCCCCGTCACTGCCTAGGTATGTCAATATG
AAGAAGAAAAATCGTTCAAAG


cds序列:ATGGCGGCGACGATGACGGTGGAGGAGGTGAGGAAGGCGCAGCGGGCGGAGGGGCCGGCC
ACGGTGCTGGCGATCGGCACGGCGACCCCGGCGAACTGCGTGTATCAGGCCGACTACCCG
GACTACTACTTCAAGGTCACCAAGAGCGACCACATGGCCGACCTCAAGGAGAAGTTCAAG
AGGATGTGTGACAAATCGCAGATCAGGAAGAGGTACATGCACCTAACGGAGGAGATCCTA
CAGGAAAACCCCAACATGTGCGCCTACATGGCGCCGTCTCTGGACGCGCGCCAGGATATT
GTGGTTGTCGAGGTCCCGAAGCTCGGGAAGGCGGCGGCGCAAAAGGCGATCAAGGAGTGG
GGACAGCCACGGTCTAAGATCACCCACCTCGTCTTCTGCACCACCTCCGGTGTGGATATG
CCGGGGGCCGACTACCAGCTGACCAAGATGCTCGGTCTTCGCCCGTCCGTGAAGCGCCTC
ATGATGTATCAACAGGGATGCTTCGCCGGCGGGACGGTGCTTCGCCTAGCCAAAGACCTT
GCTGAGAACAACCGAGGCGCGCGCGTGCTCGTGGTCTGCTCGGAGATCACCGCGGTGACC
TTCCGTGGCCCGCACGAGTCCCACCTCGACTCACTCGTGGGTCAGGCGCTCTTTGGTGAT
GGTGCAGCCGCGGTGATCATCGGTGCAGACCCCGACGTGTCCGTCGAGCGCCCCCTATTC
CAGCTGGTATCTGCGAGCCAGACGATTCTGCCAGACTCAGAGGGTGCCATCGACGGCCAC
CTCCGGGAGGTCGGCCTCACCTTCCACCTCCTCAAGGATGTGCCTGGGCTCATCTCCAAG
AACATCGAGCGCGCCCTAGAGGACGCCTTCAAGCCATTGGGTATCGATGATTGGAACTCC
GTCTTCTGGATAGCGCACCCCGGCGGGCCAGCAATCCTTGACATGGTTGAGGCCAAGGTA
AACCTCAACAAGGAACGGATGCGCGCCACCAGGCATGTCCTCTCCGAATATGGCAACATG
TCAAGCGCATGCGTTCTCTTCATCATGGACGAAATGCGCAAACGGTCCGCTGAGGATGGG
CACACCACAACCGGAGAGGGAATGGACTGGGGAGTTCTATTCGGCTTTGGTCCCGGCCTC
ACCGTCGAGACGGTCGTCCTCCATAGCGTCCCCGTCACTGCCTAG
之前设计引物跑出来的胶如下(温度梯度为:52、54、56、58、60、62),什么都没跑出来,估计是引物设计有问题,cDNA质量没问题,在其他基因中能够克隆出来。劳烦各位大神帮帮忙,不胜感激。



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一只虫子实名认证 发表于 2016-7-15 11:58 显示全部楼层
生物高手啊,没看懂
 楼主| 光辉岁月实名认证 发表于 2016-7-15 14:57 显示全部楼层
一只虫子 发表于 2016-7-15 11:58
生物高手啊,没看懂

就是帮帮忙重新设计一下引物
cristy5201 发表于 2016-9-29 09:42 显示全部楼层
谢谢您的分享!
feiyang 发表于 2016-9-29 10:03 显示全部楼层
论坛有你更精彩!
王朝生小木虫认证 发表于 2016-9-29 12:07 显示全部楼层
以后多分享一些这样的有价值的帖子啊
Captain.TT 发表于 2016-9-29 15:23 显示全部楼层
谢谢您的分享!
招财喵了个咪 发表于 2016-9-29 16:04 显示全部楼层
谢谢您的分享!
FenGShao24 发表于 2016-9-29 16:35 显示全部楼层
论坛有你更精彩!
祁山龙小木虫认证 发表于 2016-9-29 19:52 显示全部楼层
谢谢您的分享!
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