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通道载玻片--新的免疫荧光方法

jj8879576 发表于 2016-6-14 17:23 |查看: 35860|回复: 16|显示全部楼层 |阅读模式
细胞的免疫荧光实验是一个基础的细胞实验,传统的方法是在培养板中放入预先处理好的盖玻片,待细胞贴壁后,使用镊子将盖玻片拿出再开始进行固定,染色等系列工作。
现在分享一种简便的免疫荧光方法,无需爬片,培养-操作-镜检,在一个培养皿/载玻片上完成所有工作!一气呵成!
使用如图的培养皿和载玻片,免疫荧光步骤将简化为:
1.直接细胞培养
2.冲洗玻片/培养皿
3.固定细胞
4.冲洗玻片/培养皿
5.染色
6.冲洗玻片/培养皿
7.冻存液处理细胞
8.直接镜检观察
免去了指甲油封片的传统免疫荧光方法中的冗长步骤:
1.无需对盖玻片和载玻片消毒灭菌
2.无需对盖玻片进行包被
3.无需等细胞爬片
4.无需指甲油封片
之所能如此简便完成免疫荧光实验,是因为这些ibidi培养皿和载玻片的底部为特殊处理的材质,绝大多数细胞可以直接贴壁生长,而不需要另外包被。同时,这些耗材的底部薄如盖玻片,可以直接使用倒置显微镜进行观察,得到高质量的成像,适用于高端显微镜比如共聚焦显微镜。
成像效果:
下面再分享一种极致的免疫荧光方法,不仅更加简化实验步骤,而且可以节约试剂和细胞,同时还能得到更出色的成像效果。
如图的ibidi通道载玻片,简单快速完成免疫荧光实验
步骤:培养-固定-染色-镜检,只需在这个载玻片上进行4个步骤,免疫荧光实验轻松完成~
优点总结:
1、节约细胞和试剂
ibidi通道载玻片里的通道只有400μm高,以μ-slide VI为例,通道的容积只有30μl,而普通8well的腔式载玻片一个孔的容积有300μl。这意味着通道需要的试剂和细胞量仅需约十分之一!对于非常珍贵的细胞和试剂来说,这可是非常重要的。
2、成像效果好
使用通道载玻片时,能在相差显微镜下获得更好的成像效果。因为通道上下都是平坦的,不会因为凹液面的折射现象影响到相差显微镜成像。而well式的开放小室的相差成像会受到培养皿盖和液面的折射现象影响。
3、细胞分布均匀
在通道载玻片中,由于没有培养皿壁的影响,铺入细胞后,不需要平时的混匀操作,细胞的分布就非常均匀了。而使用开放小室,有可能在铺细胞混匀后,细胞还是会聚集在小室的边缘或中心上。如下图所示。a 是明场相差成像,b为荧光成像。

免疫荧光本身就是个十分基础的实验,如今的科技更是便利了实验,实验也发展了科技。
以上方法分享给有需要的,奔跑在科研前沿的童鞋们~更快更省地做好免疫荧光噢!


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落雨星痕 发表于 2016-9-29 06:45 显示全部楼层
好东西一定要看看!
gdtz@tom.com 发表于 2016-9-29 09:49 显示全部楼层
以后多分享一些这样的有价值的帖子啊
落雨星痕 发表于 2016-9-29 09:50 显示全部楼层
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yellowgirl21 发表于 2016-9-29 12:25 显示全部楼层
大家都不容易!
龚颖~~ 发表于 2016-9-29 15:07 显示全部楼层
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542708169 发表于 2016-9-29 15:56 显示全部楼层
谢谢您的分享!
pieroabc 发表于 2016-9-29 17:07 显示全部楼层
大家都不容易!
kangmaj 发表于 2016-9-29 17:08 显示全部楼层
好东西一定要看看!
scw2007imu 发表于 2016-9-29 20:41 显示全部楼层
大家都不容易!
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