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[生物与医学]

通道载玻片--受牙龈菌感染的Ca9-22细胞中IL-33免疫荧光染色实验

jj8879576 发表于 2016-7-8 16:11 |查看: 49278|回复: 8|显示全部楼层 |阅读模式
细胞的免疫荧光实验是一个基础的细胞实验,传统的方法是在培养板中放入预先处理好的盖玻片,待细胞贴壁后,使用镊子将盖玻片拿出再开始进行固定,染色等系列工作。为了简化这一工作,一系列底部适合直接成像的细胞耗材应运而生,如图:

日本的科研人员在研究细胞因子IL-33在Ca9-22细胞中免疫荧光染色试验时使用了一种通道载玻片。IL-33是一种在内皮细胞中常规表达的细胞因子,其参与调节了先天免疫细胞的Th2 细胞因子介导的免疫应答。研究人员想研究增强IL-33表达的牙周内皮细胞中牙周菌Porphyromonas gingivalis所发挥的作用。研究人员使用牙周菌P.gingivalis刺激Ca9-22细胞,再测试其中IL-33的表达。

Porphyromonas gingivalis Gingipain-Dependently Enhances IL-33 Production in Human Gingival Epithelial Cells
H. Tada, T. Matsuyama, T. Nishioka, M. Hagiwara, Y. Kiyoura, H. Shimauchi and K. Matsushita
PloS one, 2016, 10.1371/journal.pone.0152794

一)实验材料:
1)Ca9-22细胞
2)牙周菌P.gingivalis      50 μg/ml
3)多聚甲醛溶液            4%
4)BSA                    1%PBST溶液
5)藻红蛋白偶联的大鼠抗人IL-33抗体  (clone, 390412; R&D Systems)
6)DAPI
8)六通道载玻片          ibiTreat,德国ibidi公司,80606

图一:通道载玻片示意图。细胞的免疫荧光实验简化,并且节约试剂(单通道30μl),细胞分布及其均匀,成效效果好。

二)实验步骤
1)单通道铺入3×105 Ca9-22细胞,37℃,5%CO2环境中孵育过夜待细胞贴壁。
2)使用无细胞培养基,轻轻冲洗通道,移除未贴壁细胞(图二)。

图二:冲洗换液方法,蓝色代表新的无细胞培养基
3)用50 μg/ml牙周菌P.gingivalis,(MOI为0.13)加入通道中,刺激Ca9-22细胞4天
4)用4%的多聚甲醛固定15分钟
5)用1%BSA的PBST溶液封闭30分钟
6)使用0.5μg/ml的藻红蛋白偶联的大鼠抗人IL-33抗体4℃孵育1小时
7)DAPI孵育1分钟
8)用荧光显微镜观测数据。

三)实验结果


图三:牙周菌P.gingivalis增强牙周内皮细胞中IL-33的表达。用50 μg/ml牙周菌P.gingivalis,刺激Ca9-22细胞后使IL-33(红色)表达有显著的提高。细胞核(蓝色)

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liu714 发表于 2016-9-29 10:58 显示全部楼层
谢谢您的分享!
lijiaw2009 发表于 2016-9-29 20:30 显示全部楼层
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朱剑文小木虫认证 发表于 2016-9-29 20:32 显示全部楼层
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寂静的夜 发表于 2016-9-30 07:16 显示全部楼层
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xiaojuan 发表于 2016-9-30 09:49 显示全部楼层
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招财喵了个咪 发表于 2016-9-30 11:02 显示全部楼层
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hxk06102558 发表于 2016-9-30 12:34 显示全部楼层
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dengmxgz 发表于 2016-9-30 15:15 显示全部楼层
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