凝血酶

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[生物与医学]

凝血酶

 楼主| ll8848 发表于 2020-3-3 14:23  
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凝血酶Thrombin)来源于牛血浆(猪血浆),分子量 37KD,是由两条肽链(31KD 6KD)通过二硫键组成的。凝血酶是凝血酶原(凝血因子 Ⅱ)激活后形成的蛋白质水解酶,其催化纤维蛋白原(fibrinogen)水解掉 A 肽和 B 肽,由此形成纤维蛋白单体,单体进一步聚合,在血小板、红细胞和白细胞等参与下形成血凝块。
由于凝血酶具有切割序列专一性强,水解效率高的特点,它被广泛地应用于基因工程产品的开发,其应用之一是作为工具蛋白酶用于重组融合蛋白质的特异性断裂,尤其适用于生物工程制药业及基因工程、生物化学、分子生物学等研究。
凝血酶是一种广泛用于切割标签的蛋白酶,能够有效切质量比仅为 1:2000 的蛋白。切割可在 20℃ 37℃之间切割 0.3 16 小时。凝血酶最佳切割位点是X4-X3-P-R[K]-X1'-X2',这里X4 和 X3 是疏水氨基酸而 X1' X2'是非酸性氨基酸,一些经常使用的识别位点是L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F, M-Y-P-R-G-N。在X4-X3-P-R-G-X2'之间切割比在 X4-X3-P-K-L-X2'更有效。其他识别位点是
X2-R[K]-X1', 这里X2 或者 X1'是甘氨酸,例如 A-R-G G-K-A,这里切割发生在第二个残基后。在凝血酶切割位点和 N 末端标签之间插入五个甘氨酸残基可改善切,通过这一"甘氨酸连接肽"只需较少酶量就可达到完全切割,而且也可以避免可能发生的错误切割。有效的消化缓冲液是 20mMTris-HCl 缓冲液,含 150mM 氯化钠,pH8.0。凝血酶可从切割产物中用 p-氨基琼脂糖亲和纯化,或者苯甲脒琼脂糖移去。
产品特点:
1、纯度高:SDS-PAGE 检测图谱无杂蛋白条带;
2、比活高:比活力大于 200 单位/mgpr;
3、不含有其他蛋白酶活性;
4、产品稳定性好:冻干产品在室温条件下考察 12 个月,酶活力未见显著变
化,冷藏条件下保存 36 个月,酶活力未见显著变化。
凝血酶
 楼主| ll8848 发表于 2020-3-3 14:23   显示全部楼层
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