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[生物与医学]

大鼠胰腺移植模型制

中洪博元 发表于 2016-7-22 16:06  
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                                    深圳中洪博元生物技术有限公司 ,因为专注,所以专业。      
      胰腺移植是目前临床上有效治疗I型糖尿病,挽救II型糖尿病晚期伴肾功能不全的外科手段,因此,胰腺移植一直受到广泛的关注,至今围绕着胰腺移植,仍有许多问题需要解决,这些问题的基础研究都需要在合适的动物模
型上进行,其中大鼠因为其成本低,来源易,免疫系统与人类相似等优点,是目前器官移植领域流行的实验动物之一。但是大鼠胰腺移植模型的建立是一个难度很大的实验外科技术,操作复杂,成功率低。因此,需要建立
一种比较规范,操作简便,模型稳定且成功率高的胰腺移植模型的方法,以利于进行胰腺移植的基础研究。

一、  手术器械
显微外科手术器械包,手术显微镜1台,自制S拉钩(用橡皮筋一端带上弯成S形的大头针)4个,眼科剪1把,其它外科器械若干及纱布、棉球、棉片和橡皮条等。
二、  供、受者大鼠的选择
根据不同的研究目的选择不同的动物品系,在同种移植模型中,一般采用两种纯系健康大鼠,如Lewis大鼠,Brown Norway 大鼠(BN),DA大鼠等,国内应用Wistar,SD大鼠也比较多。其中受者大鼠于移植手术前制备成
糖尿病模型
三、大鼠糖尿病模型的建立
方法一:10%的四氧嘧啶按100mg/kg的剂量连续两天于大鼠腹股沟区皮下注射,隔日测定血糖,一周后血糖持续>16.7mmol/L者,作为合格的糖尿病受者大鼠。

方法二:采用70mg/kg肌肉注射链脲霉素,以尿糖定性强阳性,非禁食血糖>20mmol/L持续10天者为稳定的糖尿病模型。

方法三:受者鼠一次性静脉注射链脲霉素55mg/kg,第7d开始测定非禁食血糖,若血糖浓度连续3d超过22mmol/L,判定为大鼠糖尿病诱导成功。

四、术前准备及麻醉方式
术前供者禁食24h,饮用50g/L葡萄糖生理盐水,受者禁食24h,饮用25g/L葡萄糖生理盐水,供、受者麻醉均采用1%的戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射,麻醉过浅时加乙醚吸入辅助。
五、供胰切取术
麻醉成功后,经腹正中切口进腹,(1)将胃向上翻起,结扎切断胰腺和大网膜之间的血管联系及胃网膜左右动静脉,结扎十二指肠近端,切断幽门,在食管与胃交界出结扎切断胃左血管、食管,结扎切断胃短动脉并切除
全胃;(2)胰腺下缘自脾脏向胰头方向游离胰腺,保留胰管入十二指肠管约1.5cm,结扎切断肠系膜上血管;(3)结扎切断胆总管及肝固有动脉,游离门静脉至入肝门分叉处;(4)打开腹主动脉前被覆的后腹膜,结扎
切断左右肾及肾上腺动脉,完全游离腹腔动脉和肠系膜上动脉所在的腹主动脉段,经阴茎背静脉注入肝素(25U/L)生理盐水;(5)分别结扎肠系膜上动脉开口以下和腹腔动脉开口以上的腹主动脉,肠系膜上动脉开口以下
腹主动脉插管,予以4℃ Euro Collins液(或者4℃平衡液25U/L肝素溶液)灌洗移植物,同时横断门静脉,灌洗至门静脉断端流出液转清,移植物颜色由淡红变为苍白;(6)灌洗完成后,完整地切取移植物及脾脏,移植物
置4℃Euro Collins液中保存。
六、供胰植入术
(一) 腔静脉-膀胱引流式胰腺移植
下腹正中切口进腹,用生理盐水纱布将肠管推向上方,膀胱、精囊腺推向下方并以拉钩固定,游离髂血管分叉上方1.5cm左右的腹主动脉及下腔静脉,经阴茎背静脉注射肝素(25IU/L)至全身肝素化,血管夹阻断游离血管
上下端,9-0无创显微缝线作供者门静脉与受者下腔静脉连续端-侧吻合,8-0无创显微缝线作供者腹主动脉与受者腹主动脉连续端-侧吻合。吻合过程中移动胰腺时,牵动与移植胰腺相连脾脏,避免直接钳夹移植胰。吻合口
及供者腹主动脉表面可以涂少量的ZT胶,以封闭吻合口缝隙和腹主动脉营养血管,切除移植物附带的脾脏,先远心端再近心端松开血管夹,恢复移植胰血供。将供者十二指肠段与受者膀胱顶部行侧-侧吻合(3-0丝线单层连续缝合),吻合口大约0.5cm,大网膜覆盖移植物,关腹结束手术。
(二)门静脉-肠道引流式胰腺移植
腹正中切口入腹,打开腹腔,在左肾静脉以下,分离出腹主动脉,用改良过的李氏钳纵行夹住该段动脉,纵行切开动脉闭,用含肝素的平衡盐溶液冲洗管腔,在低位分离肠系膜上静脉,近端用微血管夹夹住,远端用3-0丝
线结扎,在同一水平高度同时结扎肠系膜上动脉。紧靠丝线结扎处切断肠系膜上静脉,管腔同样用含肝素的平衡盐溶液冲洗,切断缺血的小肠及回盲部(30~40%),用7-0尼龙线将两断端行端-端全层肠吻合,将移植物从
冰水中移出,用带冰屑的湿纱布覆盖移植物。先行静脉缝合,应确保静脉吻合后无扭转,供者门静脉与受者肠系膜上静脉以10-0无损伤显微缝线端-端间断缝合,在缝合过程中,用生理盐水灌洗静脉腔,并轻轻地用显微钳
分离血管边缘,避免吻合口狭窄。供胰腺的腹主动脉与受者的腹主动脉以9-0无损伤显微缝合线行端-侧连续缝合。吻合完毕后先松开静脉夹,再松开动脉夹,用干明胶海绵轻压动脉吻合口1~2min。最后,供胰的十二指肠
开口一端与受者近端空肠行端-侧吻合,另一端结扎。切除供胰上附着的脾脏,关腹结束手术。
七、术后监测和处理
根据实验研究设计的需要监测移植胰功能,如果移植胰功能正常,在发生排斥反应以前空腹血糖值正常,C-肽值正常。术后注意受者动物保温,可以置于电热毯上,以电灯热辐射24h。一般情况下,动物于术后1h内从麻醉中苏醒。术后每天皮下注射含25g/L葡萄糖和4.5g/L氯化钠的糖盐水30~40ml(内含150mg氧哌嗪青霉素),36~48h视动物情况开始正常饮食。

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 楼主| 中洪博元 发表于 2016-7-22 16:07   显示全部楼层
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hxk06102558 发表于 2016-9-29 01:12   显示全部楼层
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gongjiji 发表于 2016-9-29 09:49   显示全部楼层
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静静的木 发表于 2016-9-29 18:02   显示全部楼层
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kangmaj 发表于 2016-9-30 02:28   显示全部楼层
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