Burgio教授的实验事实上证实了NgAgo有效

 找回密码
 注册新帐号

QQ登录

只需一步,快速开始

小木虫»基因科学»Burgio教授的实验事实上证实了NgAgo有效
[基因科学]

Burgio教授的实验事实上证实了NgAgo有效

虫子个人认证 发表于 2016-8-3 06:30  
查看: 176920|回复: 11|显示全部楼层 |阅读模式
澳大利亚国立大学Gaetan Burgio博士公布的实验结果Sanger测序图。该图看起来很混乱,但仔细观察可以发现,每一个碱基的峰图,后面都跟着一个滞后的峰,如下图所示,我们用与碱基相同颜色的箭头标出了峰的位移,这实际上是移码突变造成的。我们在一个诱变/恢复试验中,将发生移码突变的片段和野生型的片段的混合物进行Sanger测序,就会出现类似的峰图。




原图来自:http://www.ipscell.com/2016/07/gaetan-burgio-new-data-theory-on-ngago-versus-crispr/

因此事实上,Burgio博士的实验中,目的基因发生了移码突变,造成这种峰图,可能恰恰证实了NgAgo有效。不过似乎NgAgo切割基因组的效率并不高,造成了多种移码型的混合物。众所周知,基因编辑技术的主要作用质之一,就是在基因中造成移码突变,使其失去功能.

Burgio博士说他们所用的引物已经过验证,是特异性的,那么,如果NgAgo无效,实验中除了目的基因的完整片段以外,不会出现任何额外条带,更不会出现移码现象。

那么出现的那些额外条带,为什么经过Sanger测序,序列是非特性的呢?我估计是因为他们设计的guider ssDNA的序列特异性不好导致的。他们的guider序列,应该就是之前CRISP/CAS9实验所用的guider,但CRISP/CAS9识别序列必须包含PAM序列,所以对序列特异性的要求没有那么高,而NgAgo方法采用ssDNA作为guider,没有PAM序列的限制,但同时对guider序列的特异性要求就高了。如果guider序列的特异性不够,肯定会对基因组序列乱切。

打个比方,这就像用google查找一个词“韩春雨”,找到的一定是“韩春雨”,但是如果你只输入“春雨”,那么出来的就不一定是“韩春雨”,还有“春雨贵如油”,“春雨医生”,…,等等。

一种新技术在诞生之际,一般都存在很多问题。NgAgo技术作为一种新技术,前途是光明的,但无疑需要针对不同的生物、细胞和基因序列,进行设计、实验条件优化,提高基因组切割和编辑效率。(汪小龙

Burgio教授的实验事实上证实了NgAgo有效
荷叶碧兰 发表于 2016-9-29 08:28   显示全部楼层
大家都不容易!
祁山龙个人认证 发表于 2016-9-29 13:52   显示全部楼层
谢谢您的分享!
男人、必自强 发表于 2016-9-29 16:25   显示全部楼层
谢谢您的分享!
pengye 发表于 2016-9-29 20:09   显示全部楼层
大家都不容易!
woainidandan 发表于 2016-9-29 22:18   显示全部楼层
以后多分享一些这样的有价值的帖子啊
辑文编译4044 发表于 2016-9-30 08:43   显示全部楼层
好东西一定要看看!
shj 发表于 2016-9-30 10:00   显示全部楼层
谢谢您的分享!
THINKER 发表于 2016-9-30 10:48   显示全部楼层
以后多分享一些这样的有价值的帖子啊
THINKER 发表于 2016-9-30 11:32   显示全部楼层
论坛有你更精彩!
您需要登录后才可以回帖 登录 | 注册新帐号

本版积分规则  | 请遵守小木虫学术科研第一站管理条例,不得违反国家法律法规

Copyright © 2014-2020 小木虫学术科研第一站(xmuchong.com)All Rights Reserved.

公安备案:津公网安备 12011102000110号

     

ICP备案/许可证号:津ICP备14003772号-3

     

跟帖评论自律管理承诺书

     

优质科研网站认证证书

| 优秀信息服务互联网站

     © 2014-2020 小木虫学术科研第一站

快速回复 返回顶部 返回列表