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[分子生物]

细胞培养时一直长不好?

 楼主| lymm 发表于 2019-5-8 15:06  
查看: 24804|回复: 1|显示全部楼层 |阅读模式
疟原虫培养时,虫一直长不起来,无法知道是不是污染的原因,从显微镜下图片能看出来吗?细胞有没有被污染,图片附下





细胞培养时一直长不好?

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善良的花朵实名认证 发表于 2019-5-9 09:20   显示全部楼层
  疟原虫培养比较复杂,需要“O”型人红细胞、人血清及由3%氧气、4%二氧化碳和93%氮气组成的气体充在培养瓶内。当然还需要基本的培养液例如RPMI1640等,而且必须每天更换。整个培养系统也必须是无菌状态的。这里例举一种培养方法:取新鲜“O”型抗凝全血,离心使血清与红细胞分离开来。

  血清按一次需要量分装于小容量的无菌瓶或试管中,-20℃保存。红细胞以RPMI1640洗涤三次后,悬浮在等量的含10%人血清的RPMI1640中,4℃保存,可使用2~3周。市售的RPMI1640液体培养液或粉末培养基溶解过滤灭菌后,加入HEPES和谷胱苷肽,使最终浓度分别为25mmol和0.6%,成为完全的RPMI1640的培养液。

  培养时取病人血,以RPMI1640洗涤2次,再加入含15%人血清的完全RPMI1640培养液,使再成为含量约为0.2%~0.4%的悬液。取悬液8ml置35cm2(70ml)无菌细胞培养瓶中,再加入红细胞悬液,使其最终成为3%~5%红细胞悬液,充入上述混合气体,紧盖瓶盖,37℃培养箱中培养。一般24小时更换培养液一次。换液时尽量不晃动细胞层,不触及红细胞,以消毒吸管除去老培养液。加入等量新鲜的含15%人血清的完全RPMI1640培养液后再轻轻悬浮细胞,37℃继续培养。同时定时吸取少量沉淀细胞涂成簿血片,姬氏染色,了解虫体生长情况。红细胞外期的培养恶性疟原虫和间日疟原虫可以成功。

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